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氯离子染色试剂盒（H01法）采用H01细胞内氯离子荧光探针染色氯离子。H01探针激发波长约为351nm，最大发射波长约为460nm。
H01具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的H01新产物，从而被滞留在细胞内。当氯离子浓度升高时，H01的荧光强度随着氯离子浓度的增加而成比例地降低。
H01的荧光强度几乎不受pH变化的影响。H01的荧光灵敏度比常用的氯离子荧光探针SPQ更高，并且荧光效果也比SPQ要好。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内氯离子浓度的变化。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞

组份	500T
试剂A：H01氯离子染色液	250μL

-20℃避光保存，避免反复冻融。可以根据需要适量分装保存。有效期6个月。


激光共聚焦/流式细胞仪/荧光显微镜/荧光酶标仪，移液器，离心机，HBSS(不含酚红)或PBS(pH7.4)，HEPES缓冲液，荧光检测用黑色96孔板


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
● 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 染色后立即进行分析。
● H01融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
● 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127可以帮助H01更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存H01溶液。
● 标记条件因细胞种类而异，据不同样本实际染色结果做相应调整，每次实验前，请先确定最佳条件。正式实验前先摸索一下细胞量、氯离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下仅供参考。

• 染色工作液的配制：
  用HEPES缓冲液稀释H01溶液200倍（每200μL缓冲液中加入1μL染色液母液），配制成H01染色工作液。
  注：
  ● 工作液需现配现用，避免反复冻存。
  ● 不能用含血清的培养基稀释探针。可以用相应的无血清培养基稀释探针。
  
• 收集培养好的待测细胞样本，用PBS或HBSS洗涤细胞3次。
  注：
  ● 培养基血清中的酯酶会降解H01探针，从而降低H01进入细胞的效果。所以加工作液之前必须充分洗涤细胞，尽量去除培养基残留。
  
• 离心去上清后，将H01染色工作液加入细胞，在37℃避光孵育30～60分钟。
  注：
  ● 关于孵育的时间，首次预实验不能确定，建议先孵育30分钟。
  ● 根据荧光效果：如果太强，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。
  ● 染色工作液加入量以覆盖细胞即可。
  
• 用HBSS洗涤细胞3～5次。
  
• 用HBSS重悬细胞。
  
• 然后用该细胞进行荧光氯离子检测。
  激发波长351nm，发射波长460nm。
  注：
  ● 荧光强度强，氯离子浓度低。

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